عنوان پایان‌نامه
شیوع آلودگی به مارشالاژیا
- رشته تحصیلی
- انگل شناسی دامپزشکی
- مقطع تحصیلی
- دکتری تخصصی PhD
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 445 ت;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 445 ت;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 49110
- تاریخ دفاع
- ۲۱ خرداد ۱۳۹۰
- دانشجو
- حمید رضا شکرانی
- استاد راهنما
- پرویز شایان
- چکیده
- نماتودهای لوله گوارش نشخوارکنندگان کوچک از جمله عوامل اصلی کاهش تولیدات دامی می باشند. در این مطالعه میزان شیوع آلودگی به نماتودهای شیردان در گوسفندان بومی سه منطقه آب و هوایی مختلف کشور و همچنین وجود مقاومت در برابر بنزیمیدازول ها در نماتودهای همونکوس کونتورتوس جدا شده از مناطق مختلف کشور مورد بررسی قرار گرفت. امروزه مشخص شده است که عامل بروز مقاومت به بنزیمیدازول ها در تریکوسترونژیلیدهای نشخوارکنندگان کوچک، بروز جهش در ژن ایزوتیپ 1 بتاتوبولین می باشد. سه جهش نقطه ای در کدنهای 167، 198 و 200 به عنوان عوامل ایجاد مقاومت در همونکوس کونتورتوس گزارش شده است. امروزه روشهای مولکولی مطمئن و ساده ای برای تشخیص جهش در کدنهای 198 و 200 وجود دارد. به دلیل فقدان یک روش مناسب و ساده بمنظور تشخیص جهش نقطه ای در کدن 167، در این مطالعه تکنیک PCR-RFLP جدید بر اساس یک پرایمر اصلاح شده به نام UT-HC167 MF-primer ارائه گردید. در این روش با هدف ایجاد یک محل برش اختصاصی در توالی نوکلئوتیدی حاوی کدن 167 برای آنزیم اندنوکلئاز SnaB I، در موقعیت 443 پرایمر UT-HC167 MF-primer، نوکلئوتید آدنین (A) به جای نوکلئوتید تیمین (T) قرار داده شد. بدین ترتیب در سال 1387، محتویات شیردان 341 رأس گوسفند از شهرستان بابل (به نمایندگی از ناحیه I)، 318 رأس از شهرستان داران و چادگان (به نمایندگی از ناحیهII ) و 390 رأس از شهرستان شوشتر (به نمایندگی از ناحیهIII ) به طور مجزا به وسیله الک 100 چشمه در اینچ شستشو داده شد. سپس نماتودهای جدا شده از هر شیردان به طور جداگانه شمارش و در الکل 70 درصد نگهداری شد و بر اساس شاخص های ریخت شناسی جنس و گونه آنها تعیین گردید. میزان شیوع کلی آلودگی به نماتودهای شیردان معادل 98/30 درصد بود و در هر سه ناحیه مورد مطالعه 6 گونه شامل پارابرونما اسکریابینی، همونکوس کونتورتوس، مارشالاژیا مارشالی، تلادورساژیا سیرکومسینکتا، اوسترتاژیا اوکسیدانتالیس و اوسترتاژیا تریفورکاتا شناسایی گردید. به طور کلی در هر سه ناحیه مورد مطالعه میزان شیوع و شدت آلودگی به نماتودهای شیردان کم بود. با این حال در بین گونه های جدا شده بیشترین میزان شیوع را تلادورساژیا سیرکومسینکتا داشت. آزمون مربع کای و آنوا هیچگونه ارتباط معنی داری بین شیوع آلودگی به نماتودهای شیردان با متغیرهای منطقه، فصل، سن و جنس نشان نداد ولی میانگین بارکرمی نماتودهای شیردان در ناحیه I را به طور معنی داری نسبت به ناحیه III بالاتر نشان داد (P = 0.011). همچنین DNA استخراج شده از 138 کرم نر همونکوس کونتورتوس، به طور مجزا به وسیله 2 پرایمر Forward و Reverse در طرفین کدن های 167 و 200 تکثیر گردید. سپس محصول 527 جفت بازی در طی واکنش Semi-nested PCR با استفاده از پرایمرهای UT-HC167 MF-primer و Reverse تکثیر گردید و محصولی به طول 451 جفت باز بدست آمد. در مرحله بعد به منظور ارزیابی کدنهای 167 و 200 بترتیب این محصولات در معرض آنزیمهای اندنوکلئاز SnaB I و TaaI قرار گرفت. تمامی کرمهای مورد آزمایش در هر دو کدن دارای دو آلل نرمال بودند (هموزیگوس حساس). نتایج این مطالعه نشان داد که علی رغم شرایط آب و هوایی متفاوت، فون انگلی، میزان شیوع و حتی شدت آلودگی به نماتودهای شیردان در مناطق مختلف کشور شباهت دارد. همچنین مطالعه حاضر نشان داد که هنوز مقاومت به بنزیمیدازول ها در همونکوس کونتورتوس در ایران گسترش نیافته است.
- Abstract
- Gastrointestinal nematodes of small ruminants are one of the major causes of productivity loss. The present study was carried out to determine the prevalence of abomasal worm infection of native sheep in three different geo-climatic areas of Iran, also for detection of benzimidazole (BZ) resistance in Haemonchus contortus collected from different areas of the country. It is believed that BZ-resistance in trichostrongylid nematodes of small ruminants is due to the mutations of isotype 1 ?-tubulin gene. In Haemonchus contortus, three point mutations were reported at codons 167, 198 and 200 causing BZ-resistance. There were already developed several safe and easy methods for identification of point mutations at codons 198 and 200. Due to the lake of reliable and easy method for detection of point mutation at codon 167, we developed an innovative PCR-RFLP technique based on a modified forward primer (UT-HC167 MF-primer), in which the nucleotide T at the position 443 was substituted through a nucleotide A creating a restriction site for restriction endonuclease SnaB I in the nucleotide sequences including codon 167. Therefore, from March 2008 to February 2009 the contents of abomasums of 341 sheep from Babol (zone ?), 318 from Daran & Chadegan (zone II) and 390 from Shoushtar (zone ???) were washed separately in a 100 mesh sieve. The worms present in each abomasum were collected separately, counted and preserved in 70% alcohol for identification of corresponding species. The overall percentage of infection was 30.98% and Haemonchus contortus, Teladorsagia circumcincta, Marshallagia marshalli, Ostertagia occidentalis, Ostertagia trifurcata and Parabronema skrjabini were identified in all 3 studied areas. The overall prevalence rate and intensity of worm’s burden as representative of Iran, as well as in each of 3 different climatic zones were low, although Teladorsagia circumcincta was the most prevalent and frequent worm species. Using Chi-Square and ANOVA, no significant relationship was found between prevalence, season, age and sex in examined 3 regions, although the intensity of worm burden in zone I was significantly higher than zone III (P= 0.011). The isolated genomic DNA of 138 adult male H. contortus were separately used to amplify by PCR using primers flanking codons 167 and 200. The PCR product (527 bp) was then amplified by semi-nested PCR using the UT-HC167 MF-primer and the reverse primer achieving a PCR product of 451 bp in length. This PCR product was subsequently digested with the restriction endonucleases SnaB I and TaaI for analysis of the mutations at codons 167 and 200, respectively. All worms had two normal alleles (BZss homozygote) for both codons. The results show a harmony between fauna, prevalence and even intensity of abomasal helminths of sheep from different parts of Iran despite the differences in climatic conditions. The study also indicated that BZ-resistance in Haemonchus contortus is still not a serious problem in Iran.
