عنوان پایان‌نامه
بهینه سازی کشت بافت سویا و ارزیابی تحمل به شوری در پینه های سوماتیک
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی-اصلاح نباتات
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 62537;کتابخانه پردیس ابوریحان شماره ثبت: 742
- تاریخ دفاع
- ۱۴ بهمن ۱۳۹۲
- دانشجو
- زهرا نقی پور
- استاد راهنما
- حسین رامشینی, علی ایزدی دربندی
- چکیده
- به منظور بهینه¬سازی محیط کشت بافت سویا و ارزیابی تحمل به شوری در پینه¬های سوماتیک آزمایشی به صورت فاکتوریل با 3 تکرار در قالب طرح کاملاً تصادفی انجام شد. بدین منظور بذرهای ویلیامز و کلارک پس از ضد عفونی سطحی با محلول کلرین به مدت 24 ساعت بر روی محیط کشت 1/5MS بدون هورمون کشت شدند. پس از 7-6 روز ریزنمونه¬های ساقه، گره، جنین له شده و برگ از گیاهچه¬های سترون شده در 4 نوع محیط کشت پایه MS تغییر یافته شامل غلظت¬های مختلف BAP (67/1 و 7/1 میلی¬گرم بر لیتر) و IAA (75/0 میلی¬گرم بر لیتر) کشت شدند و در اتاقک رشد ( 16 ساعت روشنایی، 8 ساعت تاریکی و دمایC 25ْ) به مدت 4-3 هفته جهت کالوس¬زایی نگهداری شدند. سپس جهت شاخه¬زایی به محیط کشت MS تغییر یافته شامل غلظت¬های مختلف BAP ( 2/1 و 7/1 میلی¬گرم بر لیتر) و ساکارز (3% و 6%) انتقال یافتند و سپس به محیط کشت MS تغییر یافته (نمک¬ها و آهن MS + ویتامین B5) جهت طویل شدن شاخه منتقل شدند. طبق نتایج تجزیه واریانس اثر متقابل رقم × ریزنمونه برای صفت میانگین اندازه کالوس بسیار معنی¬دار بود (01/0p ) و ریزنمونه گره بالاترین میانگین اندازه کالوس (cm221/1) را داشت که اختلاف معنی¬داری نیز با سایر ریزنمونه¬ها داشت. درصد کالوس¬زایی برای ریزنمونه¬ها در سطح (01/0p ) بسیار معنی¬دار شد و ریزنمونه گره (43/96%) بیشترین درصد کالوس¬زایی را داشت. در صفت درصد باززایی گره بین ارقام اختلاف معنی¬دار دیده نشد. میزان باززایی در ارقام ویلیامز و کلارک در ریزنمونه گره به ترتیب با مقدار 26/59% و 56/59% خیلی به هم نزدیک بودند. ریزنمونه جنین کامل بر روی محیط کشت 1/2MSB5 با تیمارهای هورمونی 2/0 میلی¬گرم بر لیتر BAP + 2/0 میلی¬گرم بر لیتر IAA در رقم ویلیامز 66/91% و در رقم کلارک 55/80% درصد باززایی را نشان داد و گیاهچه های کاملی را تولید کردند. به منظور تعیین اثر شوری روی پینه¬های سوماتیک ریزنمونه های ساقه، برگ و گره از محیط کشت MSB5 تغییر یافته شامل 4 سطح شوری 0، 25، 50 و 100 میلی¬مولار NaCl استفاده شد.. نتایج حاصل از تجزیه واریانس در صفات چگالی کالوس در محیط شوری 100 میلی¬مولار و وزن تر کالوس در محیط شوری 25 میلی¬مولار نشان داد که اثر متقابل رقم × ریزنمونه بسیار معنی¬دار می¬باشد (01/0p ). همچنین در صفات وزن تر و حجم کالوس در محیط شوری 100 میلی¬مولار، وزن تر، حجم و چگالی کالوس در محیط شوری 50 میلی¬مولار و حجم کالوس در محیط شوری 25 میلی¬مولار اثر ریزنمونه معنی¬دار شد. در صفت چگالی کالوس در محیط شوری 50 میلی¬مولار نیز اثر رقم معنی¬دار شد.
- Abstract
- In order to optimization of soybean tissue culture and evaluation of salinity tolerance in somatic calli, an experiment was conducted in a completely randomized design with three replications. For this purpose, the Williams and Clark seeds were surface sterilized with chlorine solution for 24 hours and were cultured in 1/5MS medium without growth regulators. After 6-7 days, explants of stem, node, crushed embryo and leaves of sterile seedling were cultured in four modified MS basis mediums supplemented with BAP (1.67 and 1.7 mg/lit) and IAA (0.75 mg/lit). Cultures were stored in growth chamber under 16 hours light, 8 hours dark and 25 °C temperature conditions for 3-4 weeks. To shoot induction, they were transferred into modified MS medium with different concentrations of BAP (1.2 and 1.7 mg/lit) and sucrose (3% and 6%). In order to shoot elongation, they were transferred to modified MS medium (MS + B5 vitamins). Based on the results of analysis of variance, the average size of callus was very significant (p=0.01). Also the node explant had the highest average of callus size (1.21 cm) which had significant differences with other explants. The difference in percentage of callus formation was very significant among explants at level of p=0.01 and node explant had the highest percentage of callus formation (43.96%). No significant difference was observed between varieties for regeneration of nodes. The highest and lowest values of regeneration for Clark and Williams varieties in nodes explant were 59.56% and 59.56%, respectively. In 1/2MSB5 medium with hormonal treatment (0.2 mg/lit ? BAP + 0.2 mg/lit ? IAA) the explant of complete embryo showed 91.66% and 80.55% regeneration for Williams and Clark, respectively which produced complete plantlets. To determine the effect of salinity on the somatic callus of stem, leaf and node explants, modified MSB5 medium was used that included 4 salinity levels of 0, 25, 50 and 100 mM. Results of analysis of variance showed that the interaction of cultivar × explant, in callus density trait (level of 100 mM) and callus fresh weight (level of 25mM) was very significant (p=0.01). Also at level of 100 mM salinity, callus fresh weight and callus volume and at level of 50 mM salinity, callus fresh weight, volume and density and at level of 25 mM salinity volume of callus were significantly different among different explants. Effect of variety at level of 50 mM was significant for density of callus.
