عنوان پایان‌نامه
تشخیص ویروس بیماری زای انسانی با استفاده از تکنیک ( Fluorescence Resonance Energy Transfer) FRET
- رشته تحصیلی
- بیوتکنولوژی-میکروبی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 68411
- تاریخ دفاع
- ۲۹ شهریور ۱۳۹۳
- دانشجو
- سمانه معافی
- استاد راهنما
- مهدی رهایی جهرمی
- چکیده
- ویروس هپاتیت B، عامل بیماری هپاتیت B بوده و در موارد پیشرونده می‌تواند باعث سیروز کبدی یا سرطان کبد گردد. بنابراین، شناسایی و درمان به موقع بیماری از اهمیت ویژه‌ای برخوردار است. امروزه از دو روش الایزا و PCR به طور معمول در آزمایشگاه‌های تشخیص طبی استفاده می‌شود، اما با توجه به معایب موجود در روش‌های نامبرده، پژوهشگران همچنان به دنبال روش‌های تشخیصی بهتر می‌باشند. در دهه‌های اخیر، نانوفناوری با تکنیک‌های ویژه و بسیار حساس به طور گسترده‌ای در زمینه‌های مختلف از جمله پزشکی مورد مطالعه قرار گرفته و کاربرد تشخیصی و درمان دارد. در این پروژه، از یک نانوساختار هیبریدی DNA-نانوذره شامل یک جفت پروب الیگونوکلئوتیدی متصل به دو نانوذره مختلف و با استفاده از تکنیک نانویی FRET برای تشخیص DNA ویروس هپاتیت B استفاده شد. به این صورت که به انتهای یک پروب، کوانتوم‌دات CdTe به عنوان فلوروفور دهنده و به انتهای پروب دیگر، رودامین b به عنوان مولکول پذیرنده متصل و با DNA ویروس که قبلاً از خون بیمار استخراج شده بود، هیبرید شد. از تکنیک PCR مبتنی بر روش FRET نیز به عنوان یک روش استاندارد استفاده شد. در PCR Real-time، به طور دقیق تعداد کپی ویروس به صورت کیفی و کمّی مشخص شد، اما در FRET، با اندازه‌گیری طیف‌های جذبی و نشری، تنها حضور ویروس در محلول یعنی تشخیص کیفی اثبات گردید. مقایسه نتایج نشان داد که با بهینه‌سازی روش FRET، می‌توان به کمّی‌سازی نتایج، با توجه به شدت فلورسنس حاصله دست یافت. کلمات کلیدی: ویروس هپاتیت B، تکنیک FRET، کوانتوم‌دات CdTe، رودامین b، Real-time PCR. .
- Abstract
- Hepatitis B virus is the cause of hepatitis type B, which in progressive cases can lead to liver cirrhosis or hepatocellular carcinoma. Therefore, early detection and treatment of the disease is highly important. Today, ELISA and PCR are the two detection methods usually used for identification of the virus in clinical laboratories, but due to some disadvantages in these two methods, scientists are still looking for more suitable detection techniques. In recent decades, nanotechnology with specific and highly sensitive techniques is widely studied in various fields including medical and diagnostic use and treatment. In this project, a hybrid nanostructure of a DNA-nanoparticle consisting of a pair of oligonucleotide probes attached to two different nanoparticles was used by FRET technique to detect hepatitis B virus DNA. To prepare the hybrid nanostructure, CdTe quantumdot, as a donor fluorophore, was conjugated to probe 1 and Rhodamine b as the acceptor molecule was conjugated to probe 2. Subsequently the hybridization of the probes and the previously extracted HBV DNA from the patient blood was performed. A PCR technique based on the FRET method was used for standardization. It was possible to quantify the number of copies of the virus with high precision by real-time PCR method. However, FRET method was only able to show the presence of the virus. Comparison of the results showed that with improvement in FRET method, based on the intensity of resulted fluorescence, it is possible to quantify the results with high precision.
